Mauvais étiquetage des compléments alimentaires : étude de cas sur une sélection de produits amincissants en développant une méthode HPLC verte isocratique pour leur contrôle qualité

Jun 16, 2023

Rapports scientifiques volume 12, Numéro d'article : 22305 (2022) Citer cet article

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Une correction de l'auteur à cet article a été publiée le 31 janvier 2023

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De nos jours, une énorme population consomme des compléments alimentaires pour perdre du poids. Les produits sont souvent revendiqués comme des mélanges botaniques, mais ils ne sont pas nécessairement sûrs. Les étiquettes trompeuses sont également très courantes. Ainsi, des méthodes analytiques validées pour une large gamme de composés amincissants sont hautement nécessaires. Ici, nous présentons une méthode HPLC/PDA simple pour la quantification de sept ingrédients amincissants populaires. Les composés étudiés étaient la caféine, la cétone de framboise, le trans-resvératrol, la p-synéphrine, la p-octopamine, la p-hordénine et la 2-phénéthylamine. Après optimisation, la séparation a été effectuée sur une colonne C18 et la phase mobile était un mélange Acétonitrile:Eau contenant 0,1% d'acide phosphorique (50:50, %v/v). Le dernier composé a été élue à 9,76 min. La séparation était efficace, montrant des pics symétriques séparés par la ligne de base, sans utiliser de programmes de gradient, de modificateurs de phase mobile organique ou de phases stationnaires modifiées. La validation de la méthode a été effectuée conformément aux directives de l'ICH. Les courbes d'étalonnage étaient linéaires sur de larges plages de concentration et les valeurs LOD calculées étaient comprises entre 0,02 et 0,09 µg/mL. La verdeur de la méthode a été évaluée à l'aide des outils métriques Analytical Eco-scale, GAPI et AGREE. De plus, quatre échantillons aléatoires de produits achetés dans des magasins de suppléments en ligne ont été analysés. Les résultats ont prouvé certaines actions d'étiquetage erroné. Pour étayer nos conclusions, un ajout d'étalon a été effectué et le pourcentage moyen de récupération était de 96,67 à 101,44 % avec un écart type ≤ 2,83 entre les mesures.

Perte de poids Les compléments alimentaires (DS) sont désormais à la mode sur Internet. Ils sont considérés comme un moyen sûr et facile de maintenir la santé et d'obtenir une belle apparence physique. Les consommateurs croient à tort que ces produits contiennent des ingrédients naturels et qu'ils ont été bien testés pour leur innocuité et leur efficacité avant leur mise sur le marché. Malheureusement, ces produits en vente libre sont inefficaces et parfois nocifs. Conformément à la loi sur la santé et l'éducation des compléments alimentaires (DSHEA) de 1994, les DS ne sont pas soumis à une approbation préalable à la commercialisation concernant la pureté, l'étiquetage, la sécurité et l'efficacité. La FDA ne réagit que si des événements indésirables graves ou de nouvelles découvertes scientifiques ont été signalés après la mise sur le marché. Par conséquent, la fraude par erreur d'étiquetage est très courante. Les ingrédients sont souvent répertoriés comme des mélanges exclusifs. De plus, ces formules multi-ingrédients contiennent des ingrédients interdits ou ne contiennent pas les ingrédients actifs réels indiqués sur l'étiquette. Le consommateur devrait obtenir un produit correctement étiqueté avec une composition bien connue. Ainsi, des règlements officiels appropriés sont obligatoires. Le National Institute of Health/Office of Dietary Supplements (NIS/ODS) mène certaines initiatives réglementaires et encourage le développement de matériaux de référence standard pour les ingrédients DS et de méthodes analytiques validées pour ouvrir la voie à des pratiques de contrôle qualité fiables1,2,3.

Selon notre recherche sur le Web et dans les magasins de santé locaux, les formulations amincissantes actuellement disponibles pour le public contiennent une large gamme d'ingrédients, extraits de leurs sources naturelles ou de leurs analogues synthétiques. Parmi les composés les plus couramment utilisés dans ces produits en vente libre figurent le trans-resvératrol, la cétone de framboise et les composés de phénéthylamine ; 2-Phénéthylamine, p-Synéphrine, p-Octopamine et p-Hordénine. Il a également été remarqué que la teneur élevée en caféine est un aspect majeur dans la plupart des DS de perte de poids.

Le resvératrol est un polyphénol qui se produit naturellement dans la peau des raisins rouges pour se défendre contre les conditions de stress telles que les infections fongiques ou la détresse environnementale. Il est largement connu pour ses propriétés antioxydantes, anti-inflammatoires et cardioprotectrices. Il est également utilisé comme agent anti-obésité, étant un anti-adipocyte qui supprime les régulateurs induisant l'adipogenèse. Le resvératrol existe à la fois dans les isomères trans et cis. Cependant, la transformée est plus stable stériquement, abondante et biologiquement active4. Selon notre revue de la littérature, le trans-resvératrol a été dosé dans les produits de supplément en utilisant plusieurs techniques, y compris la chromatographie liquide haute performance en phase inversée avec détection UV et fluorescence5,6,7,8, la chromatographie sur colonne à noyau fusionné avec détection UV9, la chromatographie en couche mince haute performance10, électrophorèse capillaire avec détection UV11 et détection électrochimique12, spectrofluorimétrie synchrone à longueur d'onde constante7et onde carrée13,14 et voltamétrie impulsionnelle différentielle15,16.

La cétone de framboise est le principal composé aromatique qui donne la saveur caractéristique des framboises. Parmi ses nombreux avantages pour la santé, c'est un agent anti-obésité populaire. Il induit la lipolyse et inhibe l'absorption des graisses intestinales17. La cétone de framboise naturelle détient le statut GRAS (généralement reconnu comme sûr) depuis 196518. Bien qu'il s'agisse d'un ingrédient abondant dans la perte de poids DS, les effets indésirables de sa consommation prolongée ne sont pas encore entièrement caractérisés. Peu d'études ont rapporté une hémolyse intravasculaire, une hyperglycémie et une mortalité liée à la dose chez la souris19,20. Diverses méthodes ont été publiées pour le dosage de la cétone de framboise dans les produits DS, notamment les méthodes de chromatographie liquide à haute performance avec détection à barrette de diodes utilisant des colonnes phényl21 et la détection UV22. Elle a également été déterminée à l'aide de méthodes de chromatographie sur couche mince à haute performance22, de spectroscopie IR23 et de spectrofluorimétrie24,25,26.

Les phénéthylamines (PEA) sont des sympathomimétiques trouvés comme coupe-faim, agents thermogéniques et lipolytiques dans les formules de perte de poids. La 2-phénéthylamine est la plus abondante, suivie des ingrédients du Citrus aurantium ; p-Synéphrine, p-Octopamine et p-Hordénine. Bien qu'elles soient naturelles, la grande quantité de PEA dans DS est peut-être d'origine synthétique. Ils sont structurellement similaires à l'épinéphrine et à la noradrénaline et affectent le système de neurotransmetteur naturel du corps. Ainsi, leur sécurité reste remise en question. Ces stimulants adrénergiques exercent des effets indésirables cardiovasculaires graves qui sont exagérés avec la caféine, d'autant plus que les obèses sont déjà à haut risque. L'Agence mondiale antidopage (AMA) a répertorié la 2-phénéthylamine et la p-octopamine comme substances interdites et a inclus la p-synéphrine, la p-hordénine et la caféine dans la liste de surveillance de 2021 pour surveiller le schéma de leur abus chez les athlètes. Pourtant, ils sont toujours vus du public2,27. À notre connaissance, des méthodes analytiques ont été publiées pour le dépistage qualitatif ou la quantification des PEA. Celles-ci incluent la chromatographie sur colonne monolithique avec chimiluminescence au permanganate de potassium acide28, la chromatographie liquide haute performance en phase inverse avec détection UV29,30,31,32,33,34,35,36,37, la détection de fluorescence29,32,38 et la détection de masse33,35,39 ,40,41, chromatographie en phase gazeuse avec détection de masse42, électrophorèse capillaire43, voltampérométrie à ondes carrées et à impulsions différentielles44,45 et spectroscopie RMN46.

A ce jour, aucune méthode générale n'est disponible dans la littérature pour le dosage simultané des ingrédients amaigrissants précédemment cités. Seules quelques méthodes ont été publiées pour la séparation de mélanges de p-Synéphrine, p-Octopamine et p-Hordénine32,38,40 et parfois avec de la Caféine31,36. Un bon étiquetage des produits nécessite des méthodes analytiques fiables et validées et une méthode universelle reste indispensable.

Ici, nous avons cherché à proposer une méthode polyvalente qui pourrait être appliquée de manière réaliste aux pratiques de contrôle de la qualité dans les laboratoires réglementaires. Nous avons développé une méthode de chromatographie liquide haute performance en phase inversée validée pour la détermination simultanée de la caféine, du trans-resvératrol, de la cétone de framboise, de la p-octopamine, de la p-synéphrine, de la p-hordénine et de la 2-phénéthylamine, en utilisant un détecteur à barrette de photodiodes. La séparation a été réalisée de manière isocratique en utilisant uniquement de l'acétonitrile et de l'eau acidifiée en un court laps de temps. La validation formelle a été effectuée conformément aux directives de l'ICH et la méthode a été appliquée à l'analyse d'échantillons aléatoires de DS achetés dans des magasins de santé en ligne.

Caféine anhydre (1, 3, 7-Triméthylpurine-2, 6-dione, n° CAS [58-08-2], certifié ≥ 99,5%), 2-Phényléthylamine HCl (n° CAS [156-28-5 ], certifié ≥ 98,0 %), p-Hordenine HCl (4-(2-(Dimethylamino) ethyl) phenol hydrochloride, CAS n° [6027-23-2], certifié ≥ 99,5 %), p-Octopamine HCl (chlorhydrate de 4-(2-amino-1-hydroxyéthyl) phénol, n° CAS [770-05-8], certifié ≥ 99,5 %), p-synéphrine HCl (4-[1-Hydroxy-2-( méthylamino) éthyl] phénol chlorhydrate, n° CAS [5985-28-4], certifié ≥ 99,5 %), trans-Resvératrol (trans-3, 5, 4′-Trihydroxystilbène, n° CAS [501-36-0 ], certifié ≥ 99,0 %) et la cétone de framboise (4-(4-hydroxyphényl)-2-butanone, n° CAS [5471-51-2], certifiée ≥ 99,5 %) ont été achetées en Chine (Baoji Guokang Biotechnologie Co. Ltd); L'acétonitrile, l'eau (Fisher Chemical, Royaume-Uni) et l'acide orthophosphorique à 85 % (Merck, Darmstadt, Allemagne) étaient de qualité réactif HPLC.

L'analyse a été effectuée à l'aide du module de séparation HPLC Waters Alliance e2695 (Waters Co., MA, USA) équipé d'un système de solvant quaternaire, d'un dégazeur sous vide en ligne, d'une boucle d'injection de 100 µl ; échantillonneur automatique, compartiment à colonne chauffé et détecteur à matrice de photodiodes (PDA). La colonne analytique était RP Spherisorb® ODS-2 ; 250 × 4,6 mm avec une taille de particules de 5 µm (Waters Co., MA, USA). Le logiciel de données de chromatographie Empower-3 a été utilisé pour la collecte et l'acquisition des données. Le compartiment de la colonne et le plateau d'échantillons ont été maintenus à 25 °C. La phase mobile était un mélange d'acétonitrile : 0,1 % d'acide phosphorique dans un rapport 50 : 50 % v/v. 20 µl d'échantillons ont été injectés en triple et élués isocratiquement avec un débit de 0,9 ml/min. La durée totale d'exécution était de 11 min et la colonne a été équilibrée avec une phase mobile pendant 5 min entre les injections uniques. La détection PDA a été effectuée à 205 nm pour la caféine et la 2-phényléthylamine, à 225 nm pour la cétone de framboise, la p-octopamine, la p-synéphrine et la p-hordénine et à 305 nm pour le trans-resvératrol. L'efficacité de la séparation a été vérifiée par les résultats d'adéquation du système.

Quatre échantillons de compléments alimentaires différents indiqués pour la perte de poids ont été achetés dans des magasins de santé en ligne. L'échantillon (1) a été étiqueté pour contenir un mélange exclusif de 280 mg de caféine anhydre, de synéphrine HCl et d'octopamine HCl ; par comprimé. L'échantillon (2) contenait 125 mg de chlorhydrate de 2-phényléthylamine, 80 mg de caféine anhydre, 15 mg de chlorhydrate d'hordénine et 1 mg de chlorhydrate de synéphrine ; par comprimé. L'échantillon (3) était censé être un mélange de 400 mg de cétone de framboise (4%), 400 mg de caféine et d'extrait de raisin équivalent à 200 mg; par portion de capsules. L'échantillon (4) a été étiqueté pour contenir de la poudre de cétone de framboise 300 mg, de l'extrait de feuille de thé vert 200 mg, de la caféine anhydre 100 mg et un mélange exclusif de poudre de vinaigre de cidre de pomme, de poudre de pamplemousse, de poudre de varech, de poudre de fruit d'açai, d'extrait de graine de mangue africaine et 10 % d'extrait de resvératrol ; par portion de capsules. Tous les échantillons ont été analysés avant leur date de péremption.

Des solutions mères séparées (100 µg/mL) de tous les médicaments ont été préparées avec de l'eau, à l'exception du trans-resvératrol, qui a été dissous dans de l'acétonitrile : eau (1 : 9, %v/v). Toutes les solutions mères étaient stables pendant 7 jours lorsqu'elles étaient stockées à 4 °C. Des solutions étalons de travail pour la construction de courbes d'étalonnage ont été fraîchement préparées par une dilution aliquote linéaire appropriée des solutions mères en phase mobile.

Le contenu des gélules vidées ou les comprimés finement pulvérisés équivalents à une portion ont été pesés avec précision, dissous dans de l'eau (échantillons 1 et 2) ou de l'acétonitrile : eau (1 : 9, %v/v) (échantillons 3 et 4), soniqués pendant 10 min , des solutions filtrées et mères de chaque échantillon ont été préparées. Des dilutions appropriées de chaque échantillon ont été préparées en phase mobile pour se situer dans la plage d'étalonnage et analysées dans les conditions de séparation chromatographique mentionnées précédemment. L'efficacité d'extraction a ensuite été évaluée en utilisant la technique d'addition standard. Des quantités connues d'étalons purs ont été ajoutées aux échantillons commerciaux; ces mélanges ont ensuite été soumis à l'ensemble des étapes de préparation et de quantification de l'échantillon. Les récupérations ont été calculées en soustrayant la concentration des échantillons non dopés de la concentration totale des échantillons dopés.

Compte tenu de la faible réglementation DS, l'existence de méthodes analytiques pour identifier et quantifier simultanément les différents constituants de ces produits est très importante pour le domaine de la surveillance de la santé. Cette étude met en lumière sept composés amincissants populaires ; à savoir : Caféine, trans-resvératrol, cétone de framboise, p-octopamine, p-synéphrine, p-hordénine et 2-phénéthylamine. Une méthode RP-HPLC/PDA simple, écologique et bon marché a été développée et validée pour leur détermination simultanée. À ce jour, des méthodes analytiques sont publiées pour la quantification d'un seul composé ou d'une combinaison de quelques-uns d'entre eux. De plus, ces méthodes utilisent des programmes à gradient long et proposent des données de validation minimales5,22,30,33. Ainsi, cette proposition peut être présentée comme une méthode générale verte, simple et valide pour le contrôle de la qualité d'une grande variété de produits DS disponibles dans le commerce.

Lors de notre enquête chimique sur tous les composés mentionnés, nous avons cherché à développer une méthode verte qui montre la meilleure résolution, la forme de pic et la sensibilité en utilisant une colonne ODS conventionnelle dans un temps d'exécution très court. Le chromatogramme montrant tous les composés séparés est présenté à la Fig. 1. Une colonne C18 standard a été préférée car elle est la plus populaire parmi les laboratoires de contrôle qualité. Cependant, tous les analytes étaient hydrophiles basiques et la séparation des PEA basiques sur de la silice en phase inversée non modifiée était difficile. Au pH neutre de l'eau, les analytes basiques sont fortement retenus sur les résidus de silanol et ainsi les pics n'apparaissent pas dans les chromatogrammes pertinents. À faible pH, les silanols non ionisés et les analytes basiques ionisés limitent l'échange d'ions et permettent l'élution des composés47. Ainsi, les méthodes de la littérature utilisaient toujours des tampons acides ou des agents d'appariement d'ions (par exemple : sulfonate d'heptane ou laurylsulfate de sodium) via des programmes de gradient de composition de phase mobile et/ou de gradient de débit sur de longues durées31,48. Ces additifs de phase mobile raccourcissent la durée de vie de la colonne et les procédures de gradient fastidieuses ne sont pas réalisables pour les pratiques de contrôle qualité. Seules deux méthodes ont été publiées dans la littérature présentant une faible concentration d'acide phosphorique en phase mobile au lieu d'utiliser des modificateurs d'acide organique. Une résolution insuffisante a été observée entre les pics d'octopamine et de synéphrine malgré le fait que les deux utilisaient une composition de phase mobile à gradient et/ou une élution à gradient de débit36,37. La méthode proposée a été optimisée en ce qui concerne la composition de la phase mobile, le débit, la longueur d'onde de détection et le volume d'injection. Des mélanges de méthanol : 0,1 % d'acide phosphorique et d'acétonitrile : 0,1 % d'acide phosphorique ont été testés dans différentes proportions et débits. L'acétonitrile était plus prometteur que le méthanol en raison de sa viscosité plus faible et de sa coupure UV. Les chromatogrammes de méthanol étaient bruyants et cela réduisait la sensibilité de la méthode49. Acétonitrile : un mélange d'acide phosphorique à 0,1 % a été testé dans les rapports 30:70, 50:50 et 70:30, %v/v. Dans un faible rapport d'acétonitrile, les pics d'octopamine et de synéphrine co-éluent. L'augmentation de la proportion d'eau acidifiée a entraîné une augmentation relative de la protonation des bases et une diminution de leur rétention sur la colonne. Dans un rapport élevé d'acétonitrile, le dernier composé a été élué à 30 min avec la co-élution des pics de caféine et de trans-resvératrol. La meilleure séparation de base des sept composés a été observée avec l'élution isocratique d'acétonitrile : mélange d'acide phosphorique à 0,1 % (50:50, % v/v). L'élution isocratique était suffisante pour fournir une séparation de base satisfaisante avec une résolution entre les pics supérieure à 2, éliminant le besoin des programmes de gradient laborieux précédemment publiés et des modificateurs organiques dans la phase mobile. Des échantillons de solvant vierges ont été injectés et aucun transfert n'a été détecté entre les analyses. Différents débits de pompe ont été testés, un débit de 0,9 ml/min a montré la meilleure résolution entre les pics ainsi que le temps d'exécution le moins possible avec le dernier composé élué à 9,76 min. Bien que la cétone de framboise et les PEA aient montré des spectres UV presque similaires, ils ont été élués différemment de la colonne dans des conditions optimisées. Chaque analyte a été détecté à son λmax ; 205 nm pour la caféine et la 2-phénéthylamine, 225 nm pour la cétone de framboise, la p-synéphrine, la p-octopamine et la p-hordénine et 305 nm pour le trans-resvératrol. Le volume d'injection optimal était de 20 µl, au-dessus duquel les formes des pics étaient déformées. Par conséquent, les longueurs d'onde de détection et le volume d'injection sont attribués à la sensibilité de la méthode.

Chromatogramme HPLC–PDA de la solution standard des médicaments étudiés à 205 nm pour la caféine et la 2-phénéthylamine, 225 nm pour la cétone de framboise, la p-octopamine, la p-synéphrine, la p-hordénine et 305 nm pour le trans-resvératrol (2 µg/mL chaque).

Tous les paramètres de validation de notre méthode proposée ont été calculés conformément aux directives ICH Q2 (R1)50.

Dans les conditions chromatographiques proposées, tous les analytes cibles ont été séparés jusqu'à la ligne de base, montrant des pics bien résolus pour les solutions standard pures et les échantillons de suppléments testés. Les chromatogrammes représentatifs (Fig. 1 et 2) ne montrent aucun pic interférant aux temps de rétention des médicaments étudiés.

Chromatogramme HPLC-PDA d'échantillons de compléments alimentaires (échantillon a 1, échantillon b 2, échantillon c 3 et échantillon d 4).

Des courbes d'étalonnage de cinq à sept points ont été construites pour les médicaments étudiés, corrélant la surface de pic moyenne à la longueur d'onde de détection sélectionnée à la concentration correspondante et les équations de régression ont été calculées. Toutes les plages de linéarité et les paramètres de régression sont répertoriés dans le tableau 1. Tous les médicaments étaient linéaires sur des plages de concentration suffisamment larges avec des valeurs de coefficient de corrélation supérieures à 0,999.

La sensibilité de la méthode a été évaluée en termes de valeurs LOD et LOQ. La détermination de LOD et LOQ était basée sur les données d'étalonnage en utilisant l'écart type résiduel de la ligne de régression dans la plage de limite de détection (σ) et la pente de la courbe d'étalonnage (s), en appliquant la formule LOD = 3,3 × σ/s et LOQ = 10 × σ/s. Les résultats sont présentés dans le tableau 1.

La précision a été évaluée en analysant différentes concentrations de solutions de médicaments purs dans les plages linéaires. Les résultats de précision ont été exprimés en pourcentage moyen de récupération. L'écart type relatif en pourcentage (% RSD) a été calculé entre un ensemble de mesures en triple de trois concentrations différentes de chaque médicament effectuées le même jour et sur trois jours consécutifs pour exprimer à la fois la précision intra-journalière et inter-journalière ; respectivement. Les résultats calculés, exprimés dans le tableau 1, prouvent que notre méthode est exacte et précise, comme l'indiquent les pourcentages de récupération proches de 100 % et les valeurs % RSD inférieures à 2 %.

System suitability testing evaluates the whole components of an analytical system and efficiency of separation. During method optimization, System suitability parameters were calculated using Empower® software as described in FDA guidance for industry on Validation of Chromatographic Methods and USP-NF General Chapter <621> Chromatography–system suitability Chromatography. 258–265 (2012)." href="/articles/s41598-022-24830-1#ref-CR51" id="ref-link-section-d2869780e1464"> 51. Dans les conditions sélectionnées, les résultats (tableau 2) se situaient dans les valeurs acceptables, confirmant que le système chromatographique est efficace, montrant des pics symétriques bien résolus. Ainsi, la méthode proposée est suffisamment valide pour son objectif.

Les tests de robustesse sont une mesure du degré de fiabilité de la méthode à une variation faible mais délibérée des conditions de fonctionnement. Il met également en évidence et fixe des limites pour les paramètres critiques de la méthode. Plusieurs échantillons au même niveau de concentration ont été analysés après avoir fait varier le débit de la pompe (± 0,05 mL/min) et la composition de la phase mobile (± 2 %) et le % RSD du dosage ont été calculés à chaque variation typique. Les résultats (tableau 3) révèlent que la méthode était robuste en ce qui concerne les changements de débit. Cependant, la composition de la phase mobile est un paramètre critique de la méthode qui affecte la résolution entre les pics. L'augmentation de 2 % de la concentration d'acide phosphorique à 0,1 % dans la phase mobile n'a pas affecté le pourcentage de dosage du médicament, mais la résolution a diminué à 1,74 et 1,81 pour les pics de cétone de framboise-octopamine et d'octopamine-synéphrine ; respectivement.

Après validation, la viabilité de la méthode proposée a été approuvée. Quatre échantillons DS différents ont été achetés auprès de détaillants en ligne et analysés à l'aide de nos procédures mentionnées. L'extraction a été simplement effectuée à l'aide d'eau, sauf pour les échantillons censés contenir du resvératrol, où 10 % d'acétonitrile dans l'eau ont été utilisés. Les composés ont été identifiés sur la base des temps de rétention pertinents, des spectres UV et des échantillons enrichis avec des quantités connues d'étalons purs pour des composés spectralement similaires. Les chromatogrammes représentatifs (Fig. 3) n'ont montré aucun pic interférant dans les régions pertinentes. De plus, des tests de pureté maximale ont été effectués à l'aide du logiciel Empower® PDA pour exclure que d'éventuelles impuretés ou produits de dégradation aient été co-élués avec les composés étudiés. L'évaluation impliquait de comparer un angle de pureté à un angle de seuil pour chaque pic. L'angle de pureté, le degré d'homogénéité spectrale, compare les spectres à travers chaque point du pic au spectre au sommet du pic. L'angle de seuil est le plus grand angle de pureté possible attribué à la co-élution, au bruit, au solvant et à l'erreur du détecteur. Une impureté est détectée dans un pic lorsque son angle de pureté dépasse son angle seuil. Dans tous les produits DS testés, les pics correspondant aux médicaments étudiés ont montré un angle de pureté inférieur à l'angle de seuil (tableau 4) démontrant l'homogénéité spectrale, confirmant ainsi la pureté des pics d'élution52.

(a) GAPI—indice de procédure analytique verte (b) ACCEPTÉ – Évaluations du calculateur de GREEnness analytique de nos méthodes proposées.

Le contenu des échantillons a été mesuré et comparé en fonction des allégations sur l'étiquette. Ensuite, les échantillons ont été dopés avec des quantités connues d'étalons purs pour identifier davantage les composés et évaluer l'efficacité de l'extraction. Les résultats des dosages et des ajouts d'étalon sont présentés dans le tableau 4.

Pour les échantillons (1) et (2), les quantités mesurées concordaient assez bien avec celles indiquées sur l'étiquette. L'échantillon (1) contenait un apport total de p-synéphrine et de p-octopamine supérieur aux niveaux de sécurité, en plus de la quantité élevée de caféine2,53. Cela explique probablement l'intention du fabricant d'induire le consommateur en erreur sur la teneur en agent actif, que le mélange a été étiqueté comme un mélange exclusif sans indiquer la quantité exacte de chaque composant. Bien que les résultats d'analyse de l'échantillon (2) correspondent à l'allégation de l'étiquette, il est crucial d'avertir qu'il contient un niveau très élevé de 2-phénéthylamine synthétique interdite et qu'il est toujours disponible à la vente au public. Pour les autres échantillons testés, les résultats ont montré que le contenu réel variait largement des allégations sur l'étiquette. Aucun resvératrol n'a été détecté au-dessus de la méthode LOD dans l'échantillon (3), bien qu'il ait été étiqueté pour contenir 100 mg d'extrait de raisin. De plus, il contenait près de la moitié de sa teneur en cétone de framboise étiquetée. De même, l'échantillon (4) contenait environ 3 % de la cétone de framboise étiquetée, bien qu'elle ait été déclarée comme le principal agent actif du produit. Pour étayer l'exactitude de nos résultats, l'addition d'étalon a été appliquée aux échantillons défectueux et les récupérations moyennes ont varié entre 96,67 et 103,33 %.

La verdeur de la méthode a été évaluée à l'aide de l'outil ''Eco-Scale''. Lors de l'évaluation, il tient compte du danger et de la quantité de réactifs utilisés, de la consommation d'énergie, des risques professionnels et de la production de déchets. Chaque élément se voit attribuer un certain nombre de points de pénalité (PP) et le total des PP est soustrait d'un score total idéal de 100. Les scores d'échelle écologique > 75, > 50 ou < 50 décrivent une verdure excellente, acceptable ou inadéquate ; respectivement. Le score d'éco-échelle, calculé comme décrit par Namiesnik et al.54, était de 90 prouvant que notre méthode est une excellente méthode verte (tableau 5).

GAPI est un outil semi-quantitatif qui évalue toutes les étapes d'une procédure analytique, de la collecte d'échantillons à la préparation et à l'analyse finale. Il indique également si une méthode est qualitative ou quantitative. L'évaluation implique un symbole tricolore composé de cinq pentagrammes. Chaque section est colorée en vert, jaune ou rouge pour un respect de l'environnement élevé, moyen et faible ; respectivement. Cette mesure met visuellement en évidence les variations entre les différentes méthodologies analytiques55,56. L'évaluation GAPI de notre méthode analytique proposée a été calculée à l'aide du logiciel ComplexGAPI®57 et les résultats sont présentés à la Fig. 3a.

AGREE est une métrique automatisée qui prend en compte les 12 principes de la chimie analytique verte (SIGNIFICANCE) lors de l'évaluation. Chaque critère est noté de 0 à 1. Le résultat final est un pictogramme divisé en 12 segments. Chaque segment est coloré en vert, jaune ou rouge dans différentes intensités de couleur, selon sa verdeur. La largeur de chaque segment correspond à son poids attribué par l'utilisateur. Enfin, un score total de l'ensemble de la méthodologie analytique est présenté au milieu du pictogramme avec une couleur correspondant à ce score, où le vert foncé est associé à des valeurs proches de 1. Cette méthode est considérée comme unique pour sa flexibilité et qu'elle n'est pas seulement considère les aléas d'une méthode analytique mais aussi ses résultats58. L'évaluation AGREE de notre méthode analytique proposée a été calculée à l'aide du logiciel AGREE® et les résultats sont présentés à la Fig. 3b.

Dans ce manuscrit, le problème de l'étiquetage erroné du DS sur le marché a été évalué. Pour le dosage de la DS de perte de poids, une méthode RP-HPLC isocratique avec détection par réseau de diodes a été développée pour la séparation et la quantification de sept agents lipolytiques populaires dans la DS de perte de poids. La méthode proposée est respectueuse de l'environnement dans laquelle seuls l'acétonitrile et l'eau acidifiée sont inscrits pour une séparation complète dans un temps d'exécution suffisamment court. La séparation était efficace, montrant des pics de forme gaussienne bien résolus. La validation a été effectuée conformément aux directives de l'ICH et les résultats ont prouvé que la méthode est sensible, précise, précise et robuste sur une large plage de concentration. En outre, il a été appliqué au test de quatre produits DS achetés au hasard dans des magasins en ligne. Nos résultats ont révélé l'écart entre le contenu étiqueté et le contenu réel dans deux des échantillons analysés. Les deux autres échantillons concordaient avec les affirmations de l'étiquette. Cependant, il convient d'alerter sur le fait que ces deux échantillons contenaient des niveaux de caféine et de PEA supérieurs aux niveaux de sécurité qui figurent déjà sur la liste de surveillance/interdite de l'AMA et qui sont toujours accessibles au public. Enfin, nous pensons que cette procédure simple, verte, efficace et rentable contribuera à l'amélioration des pratiques réglementaires de DS.

Les ensembles de données générés et analysés au cours de la présente étude sont disponibles auprès de l'auteur correspondant sur demande raisonnable.

Une correction à cet article a été publiée : https://doi.org/10.1038/s41598-023-28976-4

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Département de chimie analytique pharmaceutique, Faculté de pharmacie, Université Ain Shams, Le Caire, 11566, Égypte

Noha F. El Azab, Sarah H. Abdelaal & Amira M. El-Kosasy

Département de chimie analytique, Faculté de pharmacie, Université du Caire, Rue Kasr El-Aini, Le Caire, 11562, Égypte

Saïd A. Hassan

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ENF-A. : Conceptualisation, Ressources, Analyse formelle, Rédaction – révision et édition. SHA : Conceptualisation, Méthodologie, Enquête, Analyse formelle, Rédaction du projet original. SAH : Conceptualisation, Enquête, Validation, Rédaction—révision et édition. AME-K. : Conceptualisation, Supervision, Administration de projet.

Correspondance à Sarah H. Abdelaal.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

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La version originale en ligne de cet article a été révisée : la version originale de cet article contenait une erreur dans l'orthographe de l'auteur Noha F. El Azab, qui était incorrectement désignée comme Noha F. El-Azab.

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Réimpressions et autorisations

El Azab, NF, Abdelaal, SH, Hassan, SA et al. Mauvais étiquetage des compléments alimentaires : étude de cas sur des produits amincissants sélectionnés en développant une méthode HPLC isocratique verte pour leur contrôle qualité. Sci Rep 12, 22305 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-24830-1

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Reçu : 10 septembre 2022

Accepté : 21 novembre 2022

Publié: 24 décembre 2022

DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-022-24830-1

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